“уберкулез :

Ќавигаци€ :

ќбратна€ св€зь :

ѕриготовление мазков дл€ бактериоскопического исследовани€

ѕриготовление мазков дл€ бактериоскопического исследовани€ €вл€етс€ весьма ответственной процедурой, во многом предопредел€ющей успех исследовани€. ѕри этом необходимо иметь в виду, что это одна из самых опасных процедур. “уберкулез распростран€етс€ воздушно-капельным путем через мельчайшие капельки размером около 5 мкм, содержащие возбудитель, которые при вдыхании в легких могут достигать альвеол и оседать в них, формиру€ очаг инфекции. ¬ лабораторной работе усили€ должны быть направлены на то, чтобы избежать или свести к минимуму опасность заражени€ при тех манипул€ци€х, при выполнении которых наблюдаетс€ наибольша€ опасность рассеивани€ потенциально инфекционных аэрозолей. ќсновными источниками образовани€ таких аэрозолей в лаборатори€х €вл€ютс€ манипул€ции, которые св€заны с приготовлением мазков дл€ бактериоскопии: 1) открывание контейнеров с материалом; эта манипул€ци€ особенно опасна, если между наружной стенкой горлышка контейнера и внутренней поверхностью крышки наход€тс€ частицы высохшей мокроты или если непосредственно перед открыванием контейнер подвергалс€ встр€хиванию; 2) приготовление мазков путем нанесени€ материала на предметное стекло и распределение его по поверхности стекла; 3) прожигание бактериологических петель, используемых дл€ переноса материала на стекло. ѕри выполнении этих манипул€ций следует соблюдать особую осторожность.

ћазки дл€ бактериоскопического исследовани€ готов€т из нативной необработанной мокроты. ƒл€ этого мокроту переливают в чашку ѕетри, под дно которой подложена черна€ бумага. –€дом с чашкой помещают два чистых (ранее не бывших в употреблении) и заранее промаркированных предметных стекла. — помощью двух препаровальных игл, бактериологических петель или хорошо заостренных дерев€нных палочек (дл€ каждой пробы мокроты новых) выбирают 5Ч6 наиболее плотных гнойных комочков мокроты, перенос€т их на стекло, покрывают сверху вторым стеклом, слегка придавливают и, раздвига€ стекла в разные стороны, растирают до получени€ равномерного тонкого сло€. ћазок должен занимать 2/зЧ 3Ћ стекла.

¬о врем€ приготовлени€ мазков следует соблюдать максимальную осторожность, чтобы избежать образовани€ брызг и выхода материала за кра€ стекла.

ѕриготовленные мазки помещают на 15Ч30 мин на фильтровальную бумагу дл€ просушки при комнатной температуре. ѕоскольку не всегда удаетс€ избежать попадани€ материала на кра€ стекла, то бумагу, на которой дл€ просушки раскладывают мазки, следует считать зараженной. ¬ысохшие стекла пинцетом или специальными щипцами берут за конец, на котором нанесена маркировка, и 3 раза провод€т через плам€ спиртовки или газовой горелки (обща€ продолжительность пребывани€ мазка в пламени не должна превышать 3Ч5 с), а затем помещают на чистую бумагу или специальный поднос.

÷елесообразным и в плане охраны труда, особенно рекомендуемым €вл€етс€ метод, предложенный Hain. ѕредметные стекла с мазками, расположенные на жест€ных подносах, помещают в стерилизатор и прежде всего высушивают при 37∞—. «атем температуру повышают до 105∞— и спуст€ 10 мин стерилизатор выключают. Ётим достигаютс€ надежное прикрепление мазка к стеклу и гибель микобактерий, как наход€щихс€ в материале и по кра€м стекол, так и попавших на поднос. “емпература не должна превышать 105∞—, чтобы не изменить тинкториальные свойства микобактерий.

¬ цел€х большей безопасности мазки из мокроты можно делать из осадка после обработки материала.

ћазки из жидкого патологического материала (бронхоальвеол€рные смывы, промывные воды бронхов или желудка, моча, пунктаты из закрытых полостей, экссудаты и др.) готов€т из осадка материала, полученного после обработки его кислотой или щелочью с последующим отмыванием либо нейтрализацией и центрифугированием. ¬ысушенные и фиксированные мазки окрашивают. ѕри выборе окраски учитывают метод микроскопии, с помощью которого будет осуществл€тьс€ бактериоскопическое исследование: обычный световой (масл€на€ иммерси€) или люминесцентный (флюоресцентна€ микроскопи€) микроскоп.

Ќаиболее употребл€емым и распространенным методом окраски дл€ вы€влени€ кислотоустойчивых микобактерий €вл€етс€ способ ÷ил€ Ч Ќильсена. ѕри одновременном воздействии нагревани€ и сильного протравливающего вещества фенола (карболовой кислоты), на котором готовитс€ основное крас€щее вещество фуксин, облегчаетс€ проникновение анилинового красител€ в микробную клетку и особенно в структуры ее клеточной стенки, состо€щей из липидов и миколовых кислот. ќбычные анилиновые красители не воспринимаютс€ микобактери€ми, и последние не окрашиваютс€. ѕоследующее обесцвечивание мазка в 29% растворе серной кислоты или 3% растворе сол€нокислого спирта приводит к обесцвечиванию всех некислотоустойчивых структур. “олько микобактерий, обладающие выраженной кислото- и спиртоустойчивостью, стойко удерживают краситель и остаютс€ окрашенными в красный цвет. ќбесцвеченные элементы мазка докрашивают метиленовым синим. ћикобактерий обнаруживаютс€ в препарате в виде тонких, пр€мых или слегка изогнутых €рко-красных палочек, иногда расположенных под углом в виде римской цифры V, часто кучками или небольшими скоплени€ми. Ќередко в теле палочек или отдельно от них выдел€ютс€ единичные более темные зерна или их скоплени€ (зернистые формы).

ѕри микроскопии мазков следует учитывать широкий полиморфизм микобактерий туберкулеза, особенно при исследовании материала от больных, получающих противотуберкулезные препараты. ¬ св€зи с тем что широкое применение химиопрепаратов мен€ет морфологию микобактерий, в р€де случаев при исследовании препаратов могут обнаруживатьс€ и ветвистые формы неравномерной ширины, и бледноокрашенные палочки, и осколки микобактерий, и отдельные кислотоустойчивые зерна или их скоплени€.

 роме того, в мазках из осадка мочи, промывных вод желудка и другого материала нар€ду с микобактери€ми туберкулеза могут обнаруживатьс€ и кислотоустойчивые сапрофиты, в частности в моче Ч микобактерий спермы, которые легко спутать с микобактери€ми туберкулеза. ¬ сомнительных случа€х рекомендуетс€ мазок длительно (45Ч60 мин) обесцвечивать в сол€нокислом спирте или жавеловой воде. ѕри таком методе обесцвечивани€ сапрофиты тер€ют свою окраску и выглад€т в виде палочек голубого цвета (в результате докрашивани€ мазка после обесцвечивани€ метиленовым синим).

ѕравильна€ микроскопи€ препаратов €вл€етс€ ответственной процедурой и требует высокой квалификации и большого опыта микроскописта, так как на основании результатов микроскопии ставитс€ диагноз, уточн€ютс€ эффективность лечени€ и прогноз заболевани€.

ћикроскопию окрашенных препаратов производ€т в световом микроскопе с иммерсионным объективом х∞0 и окул€ром *10 (увеличение *900). ∆елательно использовать бинокул€рный микроскоп с объективом *100. Ќа просмотр обычно требуетс€ в среднем около 5 мин. Ётого времени достаточно, чтобы просмотреть не менее 100 полей зрени€ и обнаружить единичные микобактерии. —огласно рекомендаци€м ћеждународного союза по борьбе с туберкулезом (1976), просмотр препарата следует начинать в центральной части левого кра€ мазка, постепенно передвига€сь вправо вдоль длинной оси мазка. ѕодсчитано, что просмотрев последовательно в этом направлении 100 полей зрени€, микроскопист продвинетс€ на 2 см. ¬ некоторых случа€х бактериоскопическое исследование 100 полей зрени€ оказываетс€ недостаточным (см. ниже) дл€ обоснованного заключени€ о количестве возбудителей, выдел€емых больным. ¬ таких случа€х рекомендуетс€ исследовать не менее 300 полей зрени€ по схеме, приведенной на рис. 4.1.

¬ последние годы довольно широкое распространение получил метод люминесцентной микроскопии. ќн основан на различии свечени€ микроскопируемого объекта в ультрафиолетовом или коротковолновом спектре видимого света. ¬ основе применени€ этого метода дл€ дифференциации микобактерии туберкулеза лежит способность липидов этих бактерий воспринимать люминесцентные красители и затем светитьс€ при облучении ультрафиолетовыми лучами. ¬ зависимости от примен€емых красителей микобактерии туберкулеза дают четкое €рко-красное свечение на зеленом фоне или золотисто-желтое Ч на темно-зеленом фоне. Ётим методом можно исследовать любой материал, кроме мочи, в которой могут быть сапрофиты, трудно дифференцируемые при такой окраске. ѕоследние имеют зеленоватый или апельсиновый оттенок. Ќаиболее широко распространены методы окраски акридиновым оранжевым по јдамчику и окраски аурамином-родамином.

ѕри микроскопии мазков по люминесцентному методу высока€ контрастность микроскопической картины дает возможность проводить исследовани€ при малых увеличени€х (объектив х40, окул€р х10). ѕри такой микроскопической системе увеличиваетс€ одномоментно просматриваемое поле зрени€ (по сравнению с иммерсионной микроскопией). Ёто позвол€ет вы€вл€ть единичные микобактерии и делает люминесцентный метод особенно ценным при исследовании олигобацилл€рного материала. Ћюминесцентна€ микроскопи€ значительно сокращает врем€, затрачиваемое на нахождение единичных микобактерии туберкулеза, позвол€ет быстро просмотреть весь препарат и, следовательно, повысить число находок.

Ѕыстрый доступ :

√лавна€ «акладки  онтакт
√лавна€ «акладки  онтакты

ѕопул€рные статьи :


ѕоиск :


«акладки

ќдна нопка

 урсы валют :

USA ÷Ѕ 23.5125 0.1366

EUR ÷Ѕ 36.9381 -0.1688


Ќаши друзь€ :

Copyright © “уберкулез. Ѕорьба с туберкулезом
rss
–Ъ–∞—А—В–∞