Туберкулез :

Навигация :

Обратная связь :

Сравнительные исследования препаратов

Сравнительные исследования одних и тех же препаратов, окрашенных по методу Циля — Нильсена и люминесцентными красителями, показали значительно более высокую информативность люминесцентного метода, которая, по данным различных авторов, колеблется от 9—10 до 19%.

Положительный неколичественный ответ микроскопии обычно дается в том случае, если в препарате обнаруживается не менее 3 микобактерий. Однако в случае положительного результата однозначного ответа «положительный» или «отрицательный» в настоящее время для клинических целей недостаточно. Применяется количественная оценка массивности бактериовыделения.

Количество обнаруженных в мазках микобактерий является весьма важным показателем, отражающим степень заразности больного. В современной химиотерапии легочного туберкулеза количественная оценка бактериовыделения служит одним из методов определения эффективности лечебных мероприятий. Уменьшение в процессе химиотерапии вегетирующей микобактериальной популяции трактуется как хороший прогностический признак, тогда как длительное стабильное бактериовыделение или тенденция к его увеличению рассматривается как неудачи лечения и требует незамедлительной смены лечебной тактики.

Для количественной оценки микобактериальной популяции используют бактериоскопический и культуральный методы. Результативность этих методов близка, но неравнозначна. Быстрота получения информации при применении бактериоскопического метода составляет его неоспоримую ценность по сравнению с культуральным методом. Однако последний более полноценно характеризует микробную популяцию не только с количественной, но и с качественной стороны.

Установлено, что результаты многократных бактериоскопических исследований патологического материала приближаются к результативности метода посева, особенно у больных с хроническими деструктивными формами туберкулеза. Применение двух методов в совокупности позволяет более точно количественно оценить степень бактериовыделения.

В основу применяемых в настоящее время методов количественного учета микобактерий в препарате положен метод, предложенный учениками Коха — Гаффкой и Стинкеным. Этот метод вошел в литературу как метод Гаффки в модификации Стинкена. Собирается мокрота, выделяемая больным за 24 ч. После измерения ее количества мокрота подвергается обработке и засевается на питательные среды с помощью количественного метода, а из осадка, кроме того, приготавливается мазок. Для этого на предметное стекло наносят 0,05 мл осадка мокроты, и это количество распределяют в виде мазка диаметром 15 мм на заранее откалиброванном на стекле участке. Мазок окрашивают по Цилю — Нильсену и просматривают в микроскопе не менее 100 полей зрения. Число микобактерий в каждом поле зрения записывают в специальной сетке. Затем подсчитывают среднее число микобактерий в одном поле зрения. Японскими авторами установлено, что при диаметре мазка 15 мм и увеличении микроскопа 630 раз (окуляр *7, объектив *90) в таком мазке содержится постоянное число полей зрения, соответствующее 10 000. Для определения числа микобактерий предложена специальная формула Берче (1969). Путем сравнительно несложных расчетов по ней можно определить общее число микобактерий, выделяемых больным с мокротой ежесуточно в зависимости от количества мокроты.

Однако следует признать, что метод Гаффки — Стинкена довольно сложен, требует много времени и большой точности. Поэтому предложены различные модификации этого метода, облегчающие его выполнение и ускоряющие исследование. Так, в Центральном НИИ туберкулеза РАМН разработана комплексная методика количественного определения массивности бактериовыделения (КОМБ), которая предусматривает одновременное использование бактериоскопического и культурального методов. В схему исследования входит бактериоскопия дозированного мазка из осадка мокроты, окрашенного по Цилю —- Нильсену, определение числа микобактерий в 100 полях зрения, посев материала на питательные среды Левенштейна —- Иенсена и Финна-Н с последующим подсчетом выросших колоний. Массивность микробной популяции при баатериоскопии оценивают по двум степеням: 1) скудное бактериовыделение — в дозированном мазке обнаруживается 1—-9 микобактерий в 100 полях зрения; 2) обильное — от 10 до 100 микобактерий в 100 полях зрения.

Существуют и другие схемы оценки массивности бактериовыделения. Международный союз по борьбе с туберкулезом придерживается следующей схемы количественной оценки. Подсчет выявляемых кислотоустойчивых микобактерий производят в пределах до 50 микробных особей при микроскопии по схеме, приведенной на рис. 4.1. При этом могут наблюдаться следующие варианты.

1. Обнаружено 50 микобактерий менее чем в 100 полях зрения, т. е. раньше, чем микроскопист завершил просмотр одной длины мазка. Запись: более 50 в 1 длине — >50/100 в поле зрения;

2. От 10 до 50 микобактерий обнаружено в 1 длине мазка. Указывается абсолютное число: 36/100 в поле зрения.

3. От 0 до 10 микобактерий обнаружено в 1 длине мазка.

В этом случае необходимо продолжить исследование и просмотреть 3 длины (300 полей зрения). Возможны 3 варианта:

а) обнаружено 50 микобактерий; запись 50/>100 в поле зрения;

б) обнаружено менее 50 микобактерий; указывается их количество: 29/300 в поле зрения;

в) не обнаружено микобактерий; запись: 0/300 в поле зрения. Можно провести аналогию этих результатов с более привычными

для нас понятиями обильного (массивного), умеренного и скудного бактериовыделения:

50/100 в поле зрения — соответствует обильному,

10—50/100 в поле зрения — умеренному и

50/300 в поле зрения — скудному бактериовыделению.

Клиническое значение определения массивности бактериовыделения не вызывает сомнений. Установлена прямая корреляция между массивностью микобактериальной популяции, частотой развития лекарственной устойчивости микобактерий и объемом деструктивного процесса у больных туберкулезом. У лиц с хроническими формами туберкулеза легких при ограниченных деструктивных поражениях отмечается менее интенсивное бактериовыделение (у 50% больных наблюдается отсутствие или небольшое число микобактерий в мокроте), более редкое развитие лекарственной устойчивости к противотуберкулезным препаратам и более частое прекращение бактериовыделения в процессе лечения. При распространенном деструктивном туберкулезе легких большинство больных выделяют массивную бактериальную популяцию, содержащую в 63—78% случаев устойчивых в противотуберкулезным препаратам микобактерий. У этих больных в 2 раза реже наступает прекращение бактериовыделения в результате химиотерапии. Сроки исчезновения микобактерий туберкулеза из мокроты в определенной степени коррелируют с массивностью бактериовыделения до начала химиотерапии.

Отмечено, что положительная бактериологическая динамика, проявляющаяся в резком снижении микобактериальной популяции и полном ее исчезновении из мокроты, несколько опережает рентгеноморфологические признаки инволюции процесса. Именно в этот период на фоне исчезновения типичных бактериальных форм возбудителя наиболее легко и демонстративно выявляются разнообразные качественные изменения микобактерий, проявляющиеся в возникновении различных форм биологической изменчивости микроба.

Следует отметить также, что на фоне интенсивной противотуберкулезной химиотерапии (особенно с включением в состав лечебных комбинаций рифампицина) в последние годы отмечается феномен появления в мазках из разнообразного патологического материала видимых под микроскопом и хорошо окрашивающихся по Цилю — Нильсену микобактерий, которые под влиянием лечебных препаратов на самом деле утратили жизнеспособность и способность размножаться на питательных средах. Этот феномен получил в литературе название «видимые, но нерастущие микобактерий». Для выявления этих микроорганизмов японские исследователи МигопавЫ и Уовша (1957) предложили метод окраски «на живые и мертвые».

Метод основан на различной окраске ДНК микробной клетки у живых и погибших микобактерий. В последних она находится в деполимеризованном состоянии и теряет способность окрашиваться некоторыми анилиновыми основными красителями (в частности, метиленовым зеленым), однако воспринимает дополнительную окраску пиронином, сафронином или карболовым фуксином. На окрашенном препарате живые жизнеспособные микобактерий зеленые, а погибшие, не способные к размножению, — красные.

Таким образом, для обнаружения микобактерий имеется несколько бактериоскопических мазков. Они достаточно просты, общедоступны и позволяют получить ответ в максимально короткий срок. Однако они не дают полной уверенности ни при положительном, ни при отрицательном результате бактериоскопии и потому, как правило, сопровождаются более чувствительным и результативным методом исследования — методом посева.

Быстрый доступ :

Главная Закладки Контакт
Главная Закладки Контакты

Популярные статьи :


Поиск :


Закладки

ОднаКнопка

Курсы валют :

USA ЦБ 23.5125 0.1366

EUR ЦБ 36.9381 -0.1688


Наши друзья :

Copyright © Туберкулез. Борьба с туберкулезом